1. 香树脂醇具有抗炎等功效，从植物中提取难度大、产率低。通过在酵母菌中表达外源香树脂醇 合酶基因N，可高效生产香树脂醇。回答下列问题。 

1. （1） 可从中查询基因N的编码序列，设计特定引物。如图1所示，a链为转录模板链，为保证基因N 与质粒pYL正确连接，需在引物1和引物2的5'端分别引入和限制酶识别序列。PCR扩增基 因N，特异性酶切后，利用连接DNA片段，构建重组质粒，大小约9.5kb（kb为千碱基对），假设构 建重组质粒前后，质粒pYL对应部分大小基本不变。

   

3. （2） 进一步筛选构建的质粒，以1-4号菌株中提取的质粒为模板，使用引物1和引物2进行PCR扩增，电泳 PCR 产物，结果如图2。在第5组的PCR反应中，使用无菌水代替实验组的模板DNA，目的是检验PCR反应中 是否有的污染。初步判断实验组（从“1~4”中选填）的质粒中成功插入了基因N，理由是。 
5. （3） 为提高香树脂醇合酶催化效率，将编码第240位脯氨酸或第243位苯丙氨酸的碱基序列替换为编码丙氨 酸的碱基序列，丙氨酸的密码子有GCA等。a是诱变第240位脯氨酸编码序列的引物（GCA为诱变序列），b、 c、d其中一条是诱变第243位苯丙氨酸的引物，其配对模板与a的配对模板相同。据此分析，丙氨酸的密码 子除GCA外，还有。 

   a：5'-…GCA/CCC/GAG/TTC/TGG/CTG/TTT/CCC/TCT/TTC/TTC…-3' 

   b：5'-…GAA/CTG/TGG/GAC/ACC/CTG/AAC/TAC/TTC/TCT/GAG…-3' 

   c：5'-…GCC/TGG/CTG/TTT/CCC/TCT/TTC/TTC/CCC/TAC/CAC…-3' 

   d：5'-…GAT/AAT/AAG/ATC/CGA/GAG/AAG/GCC/ATG/CGA/AAG…-3' 

7. （4） 进一步检测转基因酵母菌发酵得到的含量并进行比较，可以选出最优的香树脂醇合酶基因的改造方案